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Competenze e Tecnologie

Il gruppo di ricerca responsabile del servizio di Citofluorimetria e Cell Sorting ha acquisito negli anni elevate competenze nel campo della ricerca bio-medica. In particolare il gruppo ha esperienza (certificata da numerose pubblicazioni su riviste scientifiche internazionali) di citofluorimetria affiancata a tecniche di biologia molecolare e biologia cellulare applicate nell'ambito di progetti di ricerca riguardanti principalemente la fisiopatologia vascolare, le cellule staminali e l'onco-ematologia.

Le tecnologie a disposizione del servizio di Citofluorimetria e Cell Sorting sono all'avanguardia sul mercato e consentono innumerevoli applicazioni in molti ambiti di ricerca. In particolare il servizio si avvale dell'uso di 3 citometri con caratteristiche peculiari (come dettagliato nella sezione strumentazioni), in cui spicca per potenza e versatilità il cell sorter BD FACSAria II, che è presente in pochi centri italiani.

Esempi applicativi che il servizio può contribuire a realizzare:

  1. Applicazioni per la ricerca di base/ preclinica in particolare per la valutazione in vitro degli effetti di farmaci, citochine o composti di varia natura su cellule di diversa origine.
  2. Studi mirati a supporto della ricerca clinica.
  3. Applicazioni di supporto nello sviluppo/miglioramento di prodotti industriali che prevedano l'uso di tecniche citofluorimetriche.
  4. Supporto per protocolli innovativi di terapia cellulare in modelli preclinici.
  5. Il servizio consente di: 1) ottenere popolazioni cellulari altamente purificate, provenienti da vari tipi di tessuti umani ed animali tramite cell sorting ad alta processività; 2) caratterizzare fenotipicamente le popolazioni isolate e/o eventuali popolazioni cellulari circolanti nel sangue periferico umano o di animali da laboratorio; 3) monitorare la proliferazione, sopravvivenza e differenziamento cellulare in seguito a trattamenti farmacologici in vitro e/o in vivo. Il servizio di citofluorimetria e cell sorting collabora con i servizi di biobanca e microscopia nella caratterizzazione delle cellule di interesse.

     

     

     

    • Studio del livello di ploidia mediante colorazione con ioduro di propidio e valutazione delle fasi del ciclo cellulare in analisi monoparametrica.
    • Proliferazione cellulare: valutazione quantitativa delle varie fasi del ciclo cellulare (G0/G1, S, G2/M) mediante incorporazione di BrdU e sua rilevazione tramite doppia marcatura con anticorpo anti-BrdU/PI.
    • Valutazione quantitativa dell’apoptosi cellulare mediante AnnexinV/PI o 7AAD.
    • Monitoraggio dell'efficienza di transfezioni che prevedano l’utilizzo di molecole fluorescenti (GFP), e possibilità di sorting delle cellule GFP positive.
    • Monitoraggio del differenziamento cellulare mediante l’analisi di marcatori lineage specifici di membrana.
    • Caratterizzazione di sottopopolazioni cellulari circolanti nel sangue periferico umano o di animali da laboratorio: individuazione di sottopopolazioni linfocitarie, di monociti e granulociti mediante i parametri fisici (forward scatter e side scatter) e loro caratterizzazione immunofenotipica tramite analisi mono/multiparametrica.
    • Caratterizzazione fenotipica di popolazioni cellulari di interesse, in analisi multiparametrica con la possibilità di utilizzare fino a 9 fluorocromi diversi, e loro successiva separazione fisica in condizioni vitali.
    • Isolamento di popolazioni cellulari vitali altamente purificate (identificate da marcatori specifici di membrana) da vari tipi di tessuti umani ed animali, tramite cell sorting ad alta processività.

    L’area d’interesse di queste applicazioni riguarda sia la valutazione in vitro degli effetti di farmaci, citochine o composti di varia natura, sia la ricerca volta all’approfondimento clinico di varie patologie.

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